Método de focalización isoeléctrica para la detección de eritropoyetina recombinante

Resumen

Desde la inclusión, en el año 1990, de la Eritropoyetina (EPO) en el listado de sustancias prohibidas por el Comité Olímpico Internacional (COI) hasta la fecha, el uso de la hormona recombinante con fines de dopaje se ha popularizado en virtud del demostrado incremento de la capacidad aeróbica del atleta y la carencia de métodos analíticos para su detección inequívoca.
En el 2000 se propone el primer método directo para la detección de EPO recombinante (EPOr) en la orina, por el Laboratorio Antidoping de Francia. El método se basa en las sutiles diferencias encontradas entre el patrón de glicosilación de la hormona natural con respecto a la recombinante cuando se procesan las muestras por técnicas de isoelectroenfoque, transferencia e inmunodetección las cuales involucran el uso de anticuerpos monoclonales, conjugados enzimáticos y sustrato quimioluminiscente garantizándose de esta forma la especificidad y sensibilidad de la determinación analítica.
Los inconvenientes del método se relacionan con la necesidad de personal especializado en técnicas electroforéticas, la laboriosidad y el consumo de tiempo, no obstante ha contribuido de manera decisiva en el control del consumo de EPOr en el deporte. Es actualmente la metodología analítica vigente desde su implementación en los Juegos Olímpicos de Sydney 2000.
El presente trabajo muestra los resultados preliminares logrados en colaboración con el Departamento de Carbohidratos del Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología (CIGB), en la estandarización de la metodología vigente para la
change-newline"> detección de la Eritropoyetina recombinante (EPOr). Se logró la visualización de 5 mg de las diferentes EPOr ensayadas por focalización isoeléctrica (FI) empleando el conjugado enzimático anti EPO-HRP de producción nacional con revelado colorimétrico. Aplicaciones de EPO de 0.15 ng/100 µL fueron detectadas empleando la técnica "Dot-bloting" con el sistema de amplificación avidina-biotina-peroxidasa y revelado quimioluminiscente.
Estos resultados son alentadores para el propósito final de la técnica que debe detectar la presencia de la hormona en la orina en el orden de los 0.2 ng (200 pg).
Palabras Clave: EPO, Focalización isoeléctrica, Doping, Glicosilación